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基因診斷技術的選擇

2012-08-27 09:50 閱讀:1831 來源:愛愛醫 責任編輯:潘樂樂
[導讀] 關于如何選擇基因診斷技術有兩層含義:第一,什么情況下選擇基因診斷;第二,如果選擇了基因診斷,應當采用哪一種基因診斷技術。以下分別介紹。 1.選擇基因診斷的依據。 1)基因診斷可以彌補免疫學檢測技術的缺陷 免疫學診斷主要依賴于抗原抗體反應,應用于

    關于如何選擇基因診斷技術有兩層含義:第一,什么情況下選擇基因診斷;第二,如果選擇了基因診斷,應當采用哪一種基因診斷技術。以下分別介紹。

    1.選擇基因診斷的依據。

    1)基因診斷可以彌補免疫學檢測技術的缺陷 免疫學診斷主要依賴于抗原抗體反應,應用于臨床只能在體內產生抗體以后,也就是病程的中期及晚期,不能應用于早期診斷,往往由于地區的流行及個體的差異出現非特異交叉反應,雖然目前已制備了針對多種抗原的單克隆抗體,使抗原抗體檢測技術的特異性及敏感性有所提高,但還是解決不了方法上的一些問題。臨床上有下述幾種情況只能用基因診斷方法而不能依賴于免疫這診斷技術:

    ①在血清學結果模棱兩可不能得出結論時,或血清學指標與臨床表現不符。

    ②使用疫苗或特異性抗血清治療或免疫后的病例,用免疫學指標已經不能反應病原體感染的程度。

    ③大部分病原體可以整合入細胞內成為為整合型,免疫學方法只能測其細胞外表型。

    ④獻血員的篩選試驗僅采用免疫技術是不夠的,如配合PCR方法可提高篩選試驗的可靠性。

    ⑤某些病原體感染后,特異抗體的產生并不意味著臨床恢復及感染消失。

    但是,與免疫學技術相比,基因檢測所顯示的優越性也恰恰是它的缺陷,因為我們只能通過它來判斷病原體的有無和量的多少,至于病原體進入體內之后,機體作出了何種反應?反應的結果如何?基因檢測結果不能對此作出全面的回答。眾所周知,感染后的免疫應答,是感染病學和免疫學的重要研究內容,也是判斷被感染者病情、治療反應、預后,以及流行病學調查的重要依據。客觀地講,基因檢測和免疫學檢測技術是具有互補性的。

    2)基因診斷是病原學診斷的組成部分 傳統的病原學檢測是指病原體的分離培養,如細菌、病毒的分離和培養,但分離和培養技術迄今尚不能被運用于所有病原體,如某些病毒至今無法作形態觀察;某些細菌在體外培養的條件非常苛刻,或生長時間太長(如結核分枝桿菌)等,均難以把分離培養作為檢測這類病原體的常規手段;另外,不同的病期病原體的含量不同,因此培養后的陽性率不同;再有,用藥會直接影響到細菌培養的陽性率。上述種種都是病原體分離培養存在的缺陷。基因檢測技術基本上可以彌補上述不足,成為病原體分離培養的補充。基因診斷方法還是細菌病毒等鑒定的簡便、特異和快捷的手段。近年來,基因診斷技術在病毒的基因分型方面更是發揮了巨大的作用。但是,基因診斷不可能完全取代病原體直接分離、培養、鑒定技術。對某些病原體而言,基因診斷的特異性問題尚未完全解決;細菌對藥物的敏感度測試問題目前還不能完全用基因診斷法來解決;某種病原體的毒性,如病毒的細菌毒性測定也不能用基因診斷法完成;病原體的形態學研究更是不能為基因診斷取代。

    3)基因診斷是一種微量和快速診斷技術 在標本量很少,或需要快速獲取結果時,PCR法很有優勢。PCR法所需標本量很少,少至1μl也能取得陽性結果。

    4)基因診斷對原始標本的要求不高 這一點是其他現有技術無法比擬的。DNA不象蛋白質(抗原或抗體)那樣容易失活,因此,無論是液性的還是干燥了的標本;也無論是污染的還是非污染的標本,都可用于基因檢測。更具優勢的是,任何標本都可以通過純化或抽提以供基因檢測,這就避免了標本中可能存在的污染物和毒性物質對檢測過程的干擾。

    2.采用何種基因診斷技術

    我們可以根據對敏感度的要求、實驗室的條件、實驗人員的技能、標本的質量、標本性質、標本中待測基因的含量、臨床需要等來選擇檢測方法。對敏感度要求不高時可用雜交法;實驗室條件較好可開展PCP診斷技術;標本最較少、污染嚴重或含雜質較多以PCR法為宜;標本中待測基因含量很低也以PCR法為佳;檢測組織細胞內的基因表達或定位應采用原位雜交;觀察藥物抗病原體的療效,應采用基因定量分析技術。基因診斷技術發展很快,在方法上可供臨床醫生選用的余地很大,但與其他任何一種實驗室診斷技術一樣,它仍然受制于某些條件,選擇時應加以考慮。


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